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研究论文混匀室温静置 小时 分离心分钟 弃上清 用无菌拭子取全部

发布时间:2019-06-25 02:20 来源:未知 编辑:admin

  研究论文混匀室温静置 小时 分离心分钟 弃上清 用无菌拭子取全部沉淀接种于 选择性培养基一区 然后用接种环分区划线 共分三区。接种后的培养基置于厌氧罐内 培养小时。方法 乙醇加牛磺胆酸钠法 室温静置小时 分离心分钟 弃上清 取全部沉淀接种于 选择性培养基 牛磺胆酸钠三区划线。接种后的培养基置于厌氧罐

  研究论文混匀室温静置 小时 分离心分钟 弃上清 用无菌拭子取全部沉淀接种于 选择性培养基一区 然后用接种环分区划线 共分三区。接种后的培养基置于厌氧罐内 培养小时。方法 乙醇加牛磺胆酸钠法 室温静置小时 分离心分钟 弃上清 取全部沉淀接种于 选择性培养基 牛磺胆酸钠三区划线。接种后的培养基置于厌氧罐内 培养小时。方法 传统富集芽孢培养法 便标本加入到 肉汤中 有氧环境中 孵育 加入无水乙醇 室温静置小时 分离心分钟 弃上清 取全部沉淀接种于 选择性培养基 三区划线。接种后的培养基置于厌氧罐内 培养 小时。方法 改良快速肉汤芽孢培养法 便标本加入到 肉汤中有氧环境中 孵育分钟 加入 无水乙醇 室温静置小时 分离心分钟 弃上清 取全部沉淀接种于 选择性培养基 三区划线。接种后的培养基置于厌氧罐内 培养 小时。 艰难梭菌鉴定 涂片及生化鉴定生长的菌落进行涂片染色 选取单个菌落分纯至哥伦比亚血琼脂平板上 分别进行厌氧及需养 耐氧试验 培养 根据菌落特点、特殊气味 马厩味 、菌体形态及芽孢特点进行初步鉴定 并通过 细菌鉴定卡及 扩增艰难梭菌 基因进行鉴定。 提取分离培养的纯菌落配制成菌悬液后 加入溶菌酶使其终浓度为 孵育进行破壁处理。按照说明书使用核酸自动提取仪进行 提取。 鉴定提取的 参照 等使用的方法进行基因序列特异扩增 所用引物为 的引物。反研究论文共个循环 最后 再延伸。所得扩增产物进行 琼脂糖凝胶电泳 电泳条件为 电压 将胶块置于凝胶成像系统下观察有无特异性扩增的条带。毒素检测将提取的 进行毒素 基因检测。参照 等方法 所用引物为 目的片段为参照 】等方法 所用引物为 所用引物参照】等方法 目的片段为 目的片段为 。引物见 。反应体系为 的引物。反应程序为预变性 变性退火 个循环最后 再延伸。所得扩增产物进行 琼脂糖凝胶电泳 电泳条件为 电压 将胶块置于凝胶成像系统下观察有无特异性扩增的条带。统计学方法应用 统计学软件进行数据分析 对于 种培养方法的阳性率比较使用行 列表矿检验。结果 菌株鉴定 细菌鉴定卡鉴定结果与 的方法扩增艰难梭菌特异序列的鉴定结果相同 鉴定结果见 统计学分析份标本分别进行四种培养方法的比较 经统计学处理后 四种培养方法的阳性率差别无统计学意义 毒素基因通过的方法扩增毒素基因 产毒情况见 未发现含二元毒素基因的高产毒株。研究论文附图 研宄论文 研究论文讨论艰难梭菌为严格厌氧菌因其难于培养而得名。通过比较我们发现实验室常用的三种培养方法以及我实验室改良的富集芽孢培养法对于粪便中艰难梭菌培养的阳性率的差别无统计学意义。粪便标本在含牛磺胆酸钠与不含牛磺胆酸钠的 培养基阳性率差别没有统计学意义 改良富集肉汤培养法与传统的富集肉汤培养法对于粪便中艰难梭菌培养的阳性率没有差别 单独乙醇处理与 肉汤孵育后再经乙醇处理的标本阳性率也无差别。艰难梭菌在粪便中可以以营养状态的菌体和芽孢的形式存在。本实验采集的粪便标本在空气中暴露时间均超过 且采集后保存在有氧的甘油肉汤管中。营养细胞在有氧条件下极易死亡而芽孢是营养细胞在不利条件下存活的主要方式。芽孢需经过萌发形成营养细胞后才可以产生毒素 所以芽孢萌发是细菌变成营养状态和产生毒素的前提【 。萌发是芽孢不可逆的失去其芽孢特性并发展成营养细胞的过程。牛磺胆酸钠作为一种芽孢萌发剂 与甘氨酸共同作用可促进艰难梭菌芽孢的萌发 最近研究发现 除甘氨酸外的一些其他氨基酸也可与牛磺胆酸钠共同作用促进芽孢的萌发【 。由于芽孢自身萌发的特点 牛磺胆酸钠对艰难梭菌不同型别菌株的芽孢萌发作用不同【 株艰难梭菌芽孢孵育后发现不同芽孢在 的吸光度有显著差异。粪便中杂菌较多 直接在粪便中分离艰难梭菌的难度大 普通培养基不能达到分离目的菌的效果。含半胱氨酸 拉氧头孢。诺氟沙星的 培养基作为艰难梭菌选择性培养基 可以通过抑制肠球菌、肠杆菌及其他梭菌的生长达到分离又艮难梭茵的目的【 。我们的研究发现含牛磺胆酸钠的 培养基与普通 培养基相比 对粪便中艰难梭菌培养的阳性率无明显差别 粪便标本经单独乙醇处理与富集芽孢培养法的阳性率也无差别。这一结果与 田报道的富集芽孢培养法与其他方法相比能够增加粪便中艰难梭菌培养的阳性率的结论不一致。可能原因为牛磺胆酸钠在营养丰富的培养基中通过促进艰难梭菌芽孢的萌发使粪便培养的阳性率增加 从而体现出富集芽孢培养法的优越性。但有文献研究论文报道 一些营养丰富的培养基如 在没有牛磺胆酸钠存在时也可诱导艰难梭菌芽孢的萌发【 。本研究中的粪便标本在实验前均储存于以 为基础的甘油肉汤管中 储存液中的营养成分已使芽孢萌发 肉汤或培养基中的牛磺胆酸钠的芽孢萌发作用可能被掩盖。体外研究表明牛磺胆酸钠在营养丰富的培养基中可快速诱导艰难梭菌芽孢萌发 内使芽孢的萌发率从增加到 继续增加孵育时间芽孢的萌发率增加不明显吼 】也发现含牛磺胆酸钠的肉汤在为使艰难梭菌的芽孢萌发。本研究利用牛磺胆酸钠可快速诱导芽孢萌发的特点 将在肉汤中的孵育时间调整为 结果证明在含牛磺胆酸钠的 肉汤中孵育 与孵育 天的阳性率没有差别。本研究证明改良富集芽孢培养法与其他常用培养方法的阳性率无明显差别。国内许多实验室尚未开展艰难梭菌培养项目 而粪便中艰难梭菌的培养对于 的明确诊断、治疗以及对某地区艰难梭菌的流行病学研究都是必要的 因此对于不能及时送检需要储存的标本可采用甘油肉汤作为运送培养基 然后采用改良富集芽孢培养法经 肉汤孵育 后进行培养 与传统的富集芽孢培养法孵育 天相比大大缩短了培养周期 适合临床实验室操作 为临床明确诊断 提供了极大的方便 可以作为一种经济有效的方法在临床艰难梭菌培养中推广。小结本研究证明改良富集芽孢培养法与其他常用培养方法的阳性率无明显差别 与传统的富集芽孢培养法孵育 天相比大大缩短了培养周期 为临床明确诊断 提供了极大的方便。参考文献 苎尉吾艰难梭菌是一种革兰染色阳性的厌氧芽孢杆菌广泛分布于自然环境及动物和人的粪便中。当患者肠道菌群失调 艰难梭菌得以过度生长并释放毒素时 便引起艰难梭菌相关性疾病。艰难梭菌产毒株与非产毒株都可以在肠道内定植。定植 无症状携带 即在人体肠道内有艰难梭菌的存在 但宿主没有腹泻等相应的临床症状 岁以下婴幼儿的定植率可以达到甚至更高 随着年龄的增长携带率呈下降趋势【 对艰难梭菌的高携带率使其成为该菌和芽孢的储存库同型菌株可以在 与成人之间相互传播。艰难梭菌通过产生毒素引起机体疾病 大多数菌株可以产生 两种毒素分别由 基因编码。少数菌株可单独产生毒素引起临床症状。近年来 欧洲北美等地区高产毒株 的报道不断增加 在中国香港也有该高产毒株出现的报道【 核糖体分型是通过的方法扩增艰难梭菌 间隔区序列【 根据片段大小将艰难梭菌分成不同型别 通过型别的比较 了解艰难梭菌分离株的同源性关系 预防其在医院内相互传播。本实验收集 月石家庄住院非腹泻儿童的粪便标本进行艰难梭菌的培养和毒素基因检测 了解本地区儿童艰难梭菌无症状携带率及毒素产生隋况 并对其进行 核糖体分型 与成人临床分离株进行同源性比较 了解菌株传播情况 预防艰难梭菌在医院内引起暴发流行。材料与方法 主要仪器设备 生物安全柜 上海力申科学仪器有限公司

  住院非腹泻儿童携带艰难梭菌的流行病学特征,艰难梭菌,艰难梭菌的培养条件,酪酸梭菌,肉毒梭菌,酪酸梭菌活菌散,酪酸梭菌二联活菌散,口服酪酸梭菌活菌片,丁酸梭菌,产气荚膜梭菌

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